פאַקטיש-צייט פלואָרעססענסע קוואַנטיטאַטיווע פּקר פּרינציפּ טעקניקס און אַפּפּליקאַטיאָנס

אין אַלגעמיין, די פלואָרעססענסע אַמפּלאַפאַקיישאַן ויסבייג קענען זיין צעטיילט אין דרייַ פייזאַז: די פלואָרעססענסע הינטערגרונט סיגנאַל פאַסע, די פלורעסאַנס סיגנאַל עקספּאָונענשאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן פאַסע און די פּלאַטאָ פאַסע.בעשאַס דער הינטערגרונט סיגנאַל פאַסע, די אַמפּלאַפייד פלואָרעססענסע סיגנאַל איז מאַסקט דורך די פלואָרעססענסע הינטערגרונט סיגנאַל און ענדערונגען אין פּראָדוקט סומע קענען ניט זיין באשלאסן.אין די פּלאַטאָ פאַסע, די אַמפּלאַפאַקיישאַן פּראָדוקט ניט מער ינקריסיז עקספּאָונענשאַלי, עס איז קיין לינעאַר שייכות צווישן די סוף פּראָדוקט סומע און די סטאַרטינג מוסטער סומע, און די סטאַרטינג דנאַ קאָפּיע נומער קענען ניט זיין קאַלקיאַלייטיד באזירט אויף די לעצט PCR פּראָדוקט סומע.בלויז אין די עקספּאָונענשאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן פאַסע פון ​​די פלורעסאַנט סיגנאַל איז עס אַ לינעאַר שייכות צווישן די לאָגאַריטהם פון די פּקר פּראָדוקט סומע און די סטאַרטינג מוסטער סומע, און מיר קענען קלייַבן צו קוואַנטיפיצירן דעם אין דעם בינע.פֿאַר די קאַנוויניאַנס פון קוואַנטיפיקאַטיאָן און פאַרגלייַך, צוויי זייער וויכטיק קאַנסעפּס זענען ינטראָודוסט אין די פאַקטיש-צייט פלורעסאַנט קוואַנטיטאַטיווע פּקר טעכניק: די פלואָרעססענסע שוועל און די קאָרט ווערט.

דער שוועל איז אַ אַרטאַפישאַלי באַשטימט ווערט אויף די פלואָרעססענסע אַמפּלאַפאַקיישאַן ויסבייג.עקספּאָונענשאַל פאַסע פון ​​פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן.

Ct ווערט: איז די נומער פון סייקאַלז וואָס די פלורעסאַנס סיגנאַל אין יעדער אָפּרוף רער האט אַנדערגאָן צו דערגרייכן די באַשטימט פעלד ווערט.

די שייכות צווישן די Ct ווערט און די סטאַרטינג מוסטער: שטודיום האָבן געוויזן אַז די Ct ווערט פון יעדער טעמפּלאַטע האט אַ לינעאַר שייכות מיט די לאָגאַריטהם פון די סטאַרטינג קאָפּיע נומער פון דעם מוסטער, די מער קאפיעס פון די סטאַרטינג קאָפּיע נומער, די קלענערער די Ct. ווערט.די Ct וואַלועס זענען לעפיערעך סטאַביל.א נאָרמאַל ויסבייג קענען זיין געמאכט מיט אַ נאָרמאַל מיט אַ באַוווסט אָנהייב קאָפּיע נומער, ווו די האָריזאָנטאַל קאָואָרדאַנאַט רעפּראַזענץ די לאָגאַריטהם פון די סטאַרטינג קאָפּיע נומער און די ווערטיקאַל קאָואָרדאַנאַט רעפּראַזענץ די Ct ווערט ווי געוויזן אין די פיגור אונטן.

דעריבער, דורך באקומען די Ct ווערט פון אַן אומבאַקאַנט מוסטער, די סטאַרטינג קאָפּיע נומער פון דעם מוסטער קענען זיין קאַלקיאַלייטיד פֿון די נאָרמאַל ויסבייג.

די Ct ווערט איז נישט קעסיידערדיק און קענען זיין ינפלואַנסט דורך פאַרשידענע סאַמפּאַלז און פאַרשידענע ינסטראַמאַנץ, אפילו אויב דער זעלביקער מוסטער איז ריפּיטיד 2 מאל אויף דער זעלביקער ינסטרומענט, די Ct ווערט קענען בייַטן.

קוואַנטיטאַטיווע פלואָרעססענסע אַססעס: קוואַנטיטאַטיווע פלואָרעססענסע אַססעס קענען זיין צעטיילט אין פלורעסאַנט פּראָבעס און פלורעסאַנט דיעס דיפּענדינג אויף די מאַרקערס געניצט.פלורעסאַנט פּראָבעס אַרייַננעמען ביקאַן טעכנאָלאָגיע (מאָלעקולאַר ביקאַן טעכנאָלאָגיע, רעפּריזענטיד דורך אמעריקאנער טאַגי), טאַקמאַן פּראָבעס (רעפּריזענטיד דורך אַבי) און FRET טעכנאָלאָגיע (רעפּריזענטיד דורך ראָוש);פלורעסאַנט דיעס אַרייַננעמען סאַטשערייטאַד פלורעסאַנט דיעס און ניט-סאַטשערייטאַד פלורעסאַנט דיעס, די טיפּיש פארשטייער פון ניט-סאַטשערייטאַד פלורעסאַנט דיעס איז SYBRGreen I, וואָס איז אָפט געניצט איצט;סאַטשערייטאַד די טיפּיש פארשטייער פון ניט-סאַטשערייטאַד פלורעסאַנט דיעס איז SYBRGreenⅠ;סאַטשערייטאַד פלורעסאַנט דיעס זענען EvaGreen, LCGreen, עטק.

SYBRGreenI איז אַ קאַמאַנלי געניצט דנאַ ביינדינג פאַרב פֿאַר פלורעסאַנט פּקר, וואָס ביינדז ניט-ספּעציפיש צו טאָפּל-סטראַנדיד דנאַ.אין זיין פריי שטאַט, SYBRGreenI עמיץ אַ שוואַך פלואָרעססענסע, אָבער אַמאָל געבונדן צו טאָפּל-סטראַנדיד דנאַ, זייַן פלואָרעססענסע ינקריסיז 1000-פאַרלייגן.דעריבער, די גאַנץ פלואָרעססענסע סיגנאַל ימיטיד דורך אַ אָפּרוף איז פּראַפּאָרשאַנאַל צו די סומע פון ​​טאָפּל-סטראַנדיד דנאַ פאָרשטעלן און ינקריסיז ווי די אַמפּלאַפאַקיישאַן פּראָדוקט ינקריסיז.

אַדוואַנטאַגעס פון טאָפּל-סטראַנדיד דנאַ ביינדינג דיעס: פּשוט יקספּערמענאַל פּלאַן, בלויז 2 אָנפאַנגער פארלאנגט, ניט דאַרפֿן צו פּלאַן פּראָבעס, ניט דאַרפֿן צו פּלאַן קייפל פּראָבעס פֿאַר גיך טעסטינג פון קייפל גענעס, פיייקייט צו דורכפירן מעלטינג פונט ויסבייג אַנאַליסיס, פּרובירן די ספּעציפֿישקייט פון די אַמפּלאַפאַקיישאַן אָפּרוף, נידעריק ערשט פּרייַז, גוט גענעראַליטי און דעריבער מער קאַמאַנלי געניצט אין פאָרשונג אין שטוב און אין אויסלאנד.

פלורעסאַנט זאָנד אופֿן (טאַקמאַן טעכניק): ווען פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן איז דורכגעקאָכט, אַ פּאָר פון אָנפאַנגער איז מוסיף צוזאַמען מיט אַ ספּעציפיש פלורעסאַנט זאָנד.ווען די זאָנד איז בעשאָלעם, די פלואָרעססענסע סיגנאַל ימיטיד דורך די רעפּאָרטער גרופּע איז אַבזאָרבד דורך די קווענטשעד גרופּע און איז נישט דיטעקטאַד דורך די פּקר קיילע;בעשאַס פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן (אין די פאַרלענגערונג פאַסע), די 5'-3' קלעאַוואַגע טעטיקייט פון די טאַק ענזיים דיגרייד די זאָנד ענזימאַטיקאַללי, מאכן די רעפּאָרטער פלואָרעססענסע גרופּע און קווענטשעד פלואָרעססענסע גרופּע

אַפּפּליקאַטיאָנס פון פלורעסאַנט קוואַנטיטאַטיווע פּקר.

מאָלעקולאַר ביאָלאָגי פאָרשונג:

1. קוואַנטיטאַטיווע נוקלעיק זויער אַנאַליסיס.קוואַנטיטאַטיווע און קוואַליטאַטיווע אַנאַליסיס פון ינפעקטיאָוס חולאתן, דיטעקשאַן פון פּאַטאַדזשעניק מייקראָואָרגאַניזאַמז אָדער ווירוסעס, אַזאַ ווי די לעצטע ינפלוענציע א (H1N1) עפּידעמיע, דיטעקשאַן פון דזשין קאָפּיע נומערן פון טראַנסגעניק געוויקסן און אַנימאַלס, דיטעקשאַן פון רנאַי דזשין ינאַקטיוויישאַן רייץ, עטק.

2. דיפפערענטשאַל דזשין אויסדרוק אַנאַליסיס.פאַרגלייַך פון דזשין אויסדרוק דיפעראַנסיז צווישן באהאנדלט סאַמפּאַלז (למשל מעדיצין באַהאַנדלונג, פיזיש באַהאַנדלונג, כעמישער באַהאַנדלונג, אאז"ו ו), אויסדרוק דיפעראַנסיז פון ספּעציפיש גענעס אין פאַרשידענע פייזאַז און באַשטעטיקונג פון cDNA מיקראָarray אָדער דיפערענטשאַל אויסדרוק רעזולטאַטן

3. סנפּ דיטעקשאַן.די דיטעקשאַן פון איין נוקלעאָטידע פּאָלימאָרפיסם איז וויכטיק פֿאַר די לערנען פון יחיד סאַסעפּטאַבילאַטי צו פאַרשידענע חולאתן אָדער יחיד ענטפער צו ספּעציפיש דרוגס, און ווייַל פון די ינדזשיניאַס סטרוקטור פון מאָלעקולאַר ביקאַנז, אַמאָל די סיקוואַנס אינפֿאָרמאַציע פון ​​אַ SNP איז באַוווסט, עס איז גרינג און פּינטלעך צו ניצן דעם טעכניק פֿאַר הויך-דורכקייט SNP דיטעקשאַן.

4. מעטהילאַטיאָן דיטעקשאַן.מעטהילאַטיאָן איז פֿאַרבונדן מיט פילע מענטשלעך חולאתן, ספּעציעל ראַק, און Laird האָט געמאלדן אַ טעכניק גערופֿן מעטהיליגהט, וואָס באהאנדלט דנאַ איידער אַמפּלאַפאַקיישאַן אַזוי אַז אַנמעטהילאַטעד סיטאָסינע ווערט וראַסיל און מעטהילאַטעד סיטאָסינע איז אַנאַפעקטיד, ניצן ספּעציפיש אָנפאַנגער און טאַקמאַן פּראָבעס צו ויסטיילן צווישן מעטהילאַטעד און אַנמעטהילאַטעד דנאַ. .מער שפּירעוודיק.

מעדיציניש פאָרשונג:

1. פּרענאַטאַל דיאַגנאָסיס: מענטשן קענען נישט מייַכל יערושעדיק חולאתן געפֿירט דורך אָלטערד גענעטיק מאַטעריאַל, און ביז איצט, זיי קענען בלויז רעדוצירן די נומער פון קראַנק בייביז געבוירן דורך פּרענאַטאַל מאָניטאָרינג צו פאַרמייַדן די פּאַסירונג פון פאַרשידן יערושעדיק חולאתן.דאָס איז אַ ניט-ינווייסיוו אופֿן וואָס איז לייכט אנגענומען דורך שוואַנגער פרויען.

2. פּאַטאַדזשאַן דיטעקשאַן: די פלורעסאַנט קוואַנטיטאַטיווע פּקר אַסיי אַלאַוז קוואַנטיטאַטיווע פעסטקייַט פון פּאַטאַדזשאַנז אַזאַ ווי גאָנאָקאָקקוס, טשלאַמידיאַ טראַטשאָמאַטיס, מיקאָפּלאַסמאַ סאָליום, מענטש פּאַפּיללאָמאַ ווירוס, הערפּעס סימפּלעקס ווירוס, מענטש ימיונאָודיפישאַנסי ווירוס, העפּאַטיטיס ווירוס, ינפלוענציע ווירוס, מיקאָבאַקטעריום טובער, מיקאָבאַקטעריום טובער ווירוס.עס האט די אַדוואַנטידזשיז פון הויך סענסיטיוויטי, נידעריק מוסטער גרייס, ראַפּאַדלי און פּאַשטעס קאַמפּערד מיט טראדיציאנעלן טעסטינג מעטהאָדס.

3. מעדיצין עפיקאַסי אַססעססמענט: קוואַנטיטאַטיווע אַנאַליסיס פון העפּאַטיטיס ב ווירוס (הבוו) און העפּאַטיטיס C ווירוס (הקוו) ווייזט אַז די שייכות צווישן וויראַל מאַסע און די עפיקאַסי פון זיכער דרוגס.אויב די סערום מדרגה פון HBV-DNA דיקריסאַז בעשאַס לאַמווודינע באַהאַנדלונג און דעמאָלט ינקריסיז ווידער אָדער יקסידז די פריערדיקע מדרגה, דאָס איז ינדיקאַטיוו פון ווירוס מיוטיישאַן.

4. אָנקאָגענעטיק טעסטינג: כאָטש די מעקאַניזאַם פון אָנוווקס אַנטוויקלונג איז נאָך נישט קלאָר, עס איז וויידלי אנגענומען אַז מיוטיישאַנז אין באַטייַטיק גענעס זענען די אַנדערלייינג סיבה פון אָנקאָגעניק טראַנספאָרמאַציע.געוואקסן אויסדרוק און מיוטיישאַן פון אָנקאָגענעס קענען זיין געזען אין די פרי סטאַגעס פון פילע טומאָרס.פאַקטיש-צייט פלואָרעססענסע קוואַנטיטאַטיווע פּקר איז נישט בלויז עפעקטיוו אין דיטעקטינג מיוטיישאַנז אין גענעס, אָבער קענען אויך אַקיעראַטלי דעטעקט די אויסדרוק פון אָנקאָגענעס.דער אופֿן איז געניצט צו דעטעקט די אויסדרוק פון אַ פאַרשיידנקייַט פון גענעס אַרייַנגערעכנט די טעלאָמעראַסע hTERT דזשין, די כראָניש גראַנולאָסיטיק לוקימיאַ WT1 דזשין, די אָנקאָגעניק ער דזשין, די פּראָסטאַט ראַק PSM דזשין און אָנוווקס-פארבונדן וויראַל גענעס.

איבערגעזעצט מיט www.DeepL.com/Translator (פריי ווערסיע)